دستگاه استخراج و تشخیص نوکلئیک اسید نوکلئیک کاملا اتوماتیک

پنج قدرت:
● ابزار پیکربندی شده با مرحله استخراج و خالص سازی اسید نوکلئیک
● ابزار پیکربندی شده با ماژول استخراج اولتراسونیک
● ابزار با تمام اتوماتیک پیکربندی شده است
● ابزار با تقویت دمای متغیر پیکربندی شده است
● ابزار با کیت معرف کاملاً بسته پیکربندی شده است

1. آیا معرف های تشخیص نوکلئیک اسید نیاز به استخراج و خالص سازی دارند؟
اصل تشخیص اسید نوکلئیک به شرح زیر است: تحت عمل پرایمر، DNA پلیمراز برای انجام تقویت واکنش زنجیره ای بر روی الگوی DNA/RNA (نیاز به رونویسی معکوس NA) استفاده می شود و سپس مقدار سیگنال فلورسنت آزاد شده برای تعیین تشخیص داده می شود. آیا نمونه حاوی اسید نوکلئیک (DNA/RNA) پاتوژنی است که باید شناسایی شود.

1) نمونه هایی که استخراج یا خالص نشده اند ممکن است حاوی اجزای زیادی باشند که بر نتیجه نهایی تأثیر می گذارند: نوکلئاز (که می تواند اسید نوکلئیک مورد نظر را حل کند و باعث منفی کاذب شود)، پروتئاز (که می تواند DNA پلیمراز را کاهش دهد و باعث منفی کاذب شود)، فلز سنگین. نمک (که منجر به غیرفعال شدن سنتاز می شود و باعث مثبت کاذب می شود)، PH بیش از حد اسیدی یا قلیایی (که ممکن است باعث شکست واکنش شود)، RNA ناقص (که منجر به شکست رونویسی معکوس منفی کاذب می شود).

2)تکثیر مستقیم برخی از نمونه‌ها دشوار است: گرم مثبت و برخی انگل‌ها، به دلیل دیواره‌های سلولی ضخیم و ساختارهای دیگر، اگر فرآیند استخراج و خالص‌سازی اسید نوکلئیک را طی نکنند، کیت بدون استخراج ممکن است برای چنین مواردی شکست بخورد. نمونه ها.

بنابراین، توصیه می شود کیت تست یا ابزاری را که با مرحله استخراج اسید نوکلئیک پیکربندی شده است انتخاب کنید.

2. استخراج شیمیایی یا استخراج فراصوتی فیزیکی؟
به طور کلی، استخراج شیمیایی را می توان در بیشتر مراحل پیش تصفیه و تصفیه اعمال کرد.با این حال، در باکتری‌های گرم مثبت دیواره ضخیم و برخی انگل‌ها، این مورد نیز وجود دارد که استخراج شیمیایی نمی‌تواند الگوهای اسید نوکلئیک مؤثر را به دست آورد و در نتیجه تشخیص منفی کاذب را نشان دهد.علاوه بر این، استخراج شیمیایی اغلب از عوامل قوی استفاده می کند، اگر شستشو کامل نباشد، وارد کردن قلیایی قوی به سیستم واکنش آسان است و در نتیجه نتایج نادرست به دست می آید.

تکه تکه‌شدن اولتراسونیک از خرد کردن فیزیکی استفاده می‌کند که با موفقیت توسط GeneXpert، یک شرکت پیشرو در زمینه POCT برای مصارف انسانی، استفاده شده است و دارای مزیت مطلق در استخراج اسید نوکلئیک برخی از نمونه‌های پیچیده (مانند مایکوباکتریوم توبرکلوزیس) است.

بنابراین، توصیه می‌شود کیت یا ابزاری را انتخاب کنید که با مرحله استخراج اسید نوکلئیک پیکربندی شده باشد.و اگر ماژول استخراج اولتراسونیک وجود داشته باشد بهینه است.

3. دستی، نیمه اتوماتیک و تمام اتوماتیک؟
این مشکل هزینه نیروی کار و کارایی کار است.در حال حاضر، بیمارستان های حیوانات خانگی بدون پرسنل کافی، و استخراج و تشخیص اسید نوکلئیک کاری است که نیاز به مهارت و تجربه خاصی دارد.شکی نیست که دستگاه استخراج و تشخیص اسید نوکلئیک تمام اتوماتیک انتخاب مناسبی است.

4. تقویت دمای ثابت یا تقویت دمای متغیر؟
واکنش تقویت یک پیوند تشخیص نوکلئیک اسید است و فناوری حرفه ای درگیر در این پیوند پیچیده است.به طور کلی، از آنزیم ها برای تقویت اسید نوکلئیک استفاده می شود.در فرآیند تقویت، سیگنال فلورسانس تقویت شده یا سیگنال فلورسانس تعبیه شده شناسایی می شود.به طور کلی، هر چه سیگنال فلورسانس زودتر ظاهر شود، محتوای ژن هدف نمونه بیشتر می شود.

تقویت دمای ثابت یک تقویت اسید نوکلئیک در دمای ثابت است، در حالی که تقویت دمای متغیر یک تقویت چرخه‌ای است که دقیقاً مطابق با دناتوراسیون - بازپخت - گسترش است.زمان تقویت دمای ثابت انجام شده است، در حالی که زمان تقویت دمای متغیر تا حد زیادی تحت تأثیر نرخ افزایش و کاهش دما دستگاه است (در حال حاضر، بسیاری از سازندگان قادر به انجام 40 سیکل تقویت در حدود 30 دقیقه هستند).

اگر شرایط آزمایشگاهی خوب باشد و منطقه بندی دقیق باشد، منطقی است که بگوییم تفاوت دقت بین این دو زیاد نخواهد بود.با این حال، تقویت دمای متغیر محصولات اسید نوکلئیک بیشتری را در زمان نسبتاً کوتاه‌تری سنتز می‌کند.برای آزمایشگاه‌های بدون منطقه‌بندی دقیق و پرسنل آموزش حرفه‌ای، خطر نشت آئروسل اسید نوکلئیک بیشتر خواهد بود، مثبت کاذب پس از وقوع نشت رخ می‌دهد و حذف آن بسیار دشوار است.

بعلاوه، زمانی که نمونه پیچیده است، تقویت دمای ثابت بیشتر مستعد تقویت غیر اختصاصی است (دمای واکنش نسبی کمتر است و هر چه دمای گسترش بیشتر باشد، ویژگی اتصال پرایمر بهتر است).

تا آنجا که به فناوری فعلی مربوط می شود، تقویت دمای متغیر قابل اعتمادتر است.

5. چگونه از خطر نشت محصولات تقویت کننده اسید نوکلئیک جلوگیری کنیم؟
در حال حاضر، بسیاری از تولیدکنندگان لوله PCR نوع غده ای را به عنوان لوله واکنش اسید نوکلئیک انتخاب می کنند که توسط اصطکاک مهر و موم می شود و دناتوراسیون دما در دناتوراسیون دمای متغیر در تقویت PCR دمای متغیر به 90 درجه می رسد.
درجه سانتیگرادفرآیند مکرر انبساط با گرما و انقباض با سرما یک چالش بزرگ برای آب بندی لوله PCR است و لوله PCR نوع غده نسبتاً آسان است که باعث نشتی می شود.

بهتر است واکنش را با کیت/لوله کاملاً مهر و موم شده انجام دهید تا از نشت محصول واکنش جلوگیری شود.اگر بتوان یک کیت کاملاً مهر و موم شده برای استخراج و تشخیص اسید نوکلئیک ایجاد کرد، عالی خواهد بود.

بنابراین، دستگاه جدید استخراج و تشخیص نوکلئیک اسید نوکلئیک کاملا اتوماتیک، پنج انتخاب بهینه بالا را دارد.